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解一下影響毛細管電泳儀分離因素的原因

更新時間:2020-12-11      點擊次數(shù):1972
  今天讓我們一起來了解一下影響毛細管電泳儀分離因素的原因,話不多說下面讓我們來了解一下吧。
 
  1、緩沖液
 
  緩沖試劑的選擇主要由所需的pH決定,在相同的pH下,不同緩沖試劑的分離效果不盡相同,有的可能相差甚遠。CE中常用的緩沖試劑有:磷酸鹽、硼砂或硼酸、醋酸鹽等。
 
  毛細管電泳儀
 
  緩沖鹽的濃度直接影響到電泳介質(zhì)的離子強度,從而影響Zeta電勢,而Zeta電勢的變化又會影響到電滲流。緩沖液濃度升高,離子強度增加,雙電層厚度減小,Zeta電勢降低,電滲流減小,樣品在毛細管中停留時間變長,有利于遷移時間短的組分的分離,分析效率提高。同時,隨著電解液濃度的提高,電解液的電導將大大高于樣品溶液的電導而使樣品在毛細管柱上產(chǎn)生堆積的效果,增強樣品的富集現(xiàn)象,增加樣品的容量,從而提高分析靈敏度。
 
  但是,電解液濃度太高,電流增大,由于熱效應而使樣品組分蜂形擴展,分離效果反而變差。此外,離子還可以通過與管壁作用以及影響溶液的粘度、介電常數(shù)等來影響電滲,離子強度過高或過低都對提高分離效率不利。
 
  2、pH值
 
  緩沖體系pH的選擇依樣品的性質(zhì)和分離效率而定,是決定分離成敗的一大關(guān)鍵。不同樣品需要不同的pH分離條件,控制緩沖體系的pH值,一般只能改變電滲流的大小。
 
  pH能影響樣品的解離能力,樣品在極性強的介質(zhì)中離解度增大,電泳速度也隨之增大,從而影響分離選擇性和分離靈敏度。pH還會影響毛細管內(nèi)壁硅醇基的質(zhì)子化程度和溶質(zhì)的化學穩(wěn)定性,pH在4-10之間,硅醇基的解離度隨pH的升高而升高,電滲流也隨之升高。因此,pH為分離條件優(yōu)化時不可忽視的因素。
 
  3、分離電壓
 
  在CE中,分離電壓也是控制電滲的一個重要參數(shù)。高電壓是實現(xiàn)CE快速、高效的前提,電壓升高,樣品的遷移加大,分析時間縮短,但毛細管中焦耳熱增大,基線穩(wěn)定性降低,靈敏度降低;分離電壓越低,分離效果越好,分析時間延長,峰形變寬,導致分離效率降低。
 
  因此,相對較高的分離電壓會提高分離度和縮短分析時間,但電壓過高又會使譜帶變寬而降低分離效率。電解質(zhì)濃度相同時,非水介質(zhì)中的電流值和焦耳熱均比水相介質(zhì)中小得多,因而在非水介質(zhì)中允許使用更高的分離電壓。
 
  4、溫度
 
  溫度影響分離重現(xiàn)性和分離效率,控制溫度可以調(diào)控電滲流的大小。溫度升高,緩沖液粘度降低,管壁硅輕基解離能力增強,電滲速度變大,分析時間減短,分析效率提高。但溫度過高,會引起毛細管柱內(nèi)徑向溫差增大,焦耳熱效應增強,柱效降低,分離效率也會降低。
 
  5、添加劑
 
  在電解質(zhì)溶液中加入添加劑,例如中性鹽、兩性離子、表面活性劑以及有機溶劑等,會引起電滲流的顯著變化。
 
  表面活性劑常用作電滲流的改性劑,通過改變濃度來控制電滲流的大小和方向,但當表面活性劑的濃度高于臨界膠束濃度時,將形成膠束。
 
  加入有機溶劑會降低離子強度,Zeta電勢增大,溶液粘度降低,改變管壁內(nèi)表面電荷分布,使電滲流降低。在電泳分析中,緩沖液一般用水配制,但用水一有機混合溶劑常常能有效改善分離度或分離選擇性。
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